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葡萄糖一6一磷酸酶
更新時間:2016-01-06   點擊次數(shù):977次

(一)原理

    葡萄糖一6一磷酸酶(glucose-6-phosphatase)是滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的標(biāo)志酶。葡萄糖6一磷酸酶是糖異生途徑的關(guān)鍵酶,其轉(zhuǎn)錄的多少,決定著糖異生的速度。ELISA試劑盒

(二)材料

1.標(biāo)本組織切片。

2.Tris一馬來酸緩沖液(pH6.5)

(1)A液:取Tris1.2g、馬來酸1.16g,溶于100ml蒸餾水中。

(2)B液:0.2mol/LNaOH溶液(將0.8gNaOH溶于lOOml蒸餾水即成)。取A液25ml,B液約20ml,調(diào)pH至6.5后,加蒸餾水至100ml。

3.工作液須于用前現(xiàn)配,如有沉淀,應(yīng)過濾。其配制方法為:0.125%D一葡萄糖一6一磷酸鈉鹽或鉀鹽20ml,0.2mol/L Tris一馬來酸緩沖液(pH 6.5)20ml,3%醋酸鉛3ml,蒸餾水7ml。

4.0.1mol/L磷酸緩沖液(含3%多聚甲醛)。ELISA試劑盒

(三)方法

1.用含3%多聚甲醛的o.1mol/L磷酸緩沖液于4℃固定組織切片標(biāo)本2min。

2.用蒸餾水洗5次,各2min。

3.置于工作液中,37℃孵育15~20min。

4.用蒸餾水洗2次,各2min。

5.其余步驟同酸性磷酸酶染色步驟7~10。

6.對照設(shè)立對照的方法有兩種:①在作用液中不加反應(yīng)底物。②用口甘油磷酸鈉代替底物。

(四)結(jié)果

    酶活性部位有棕黑色沉淀,對照標(biāo)本無此沉淀。ELISA試劑盒

 

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